分离纯化,分离纯化早期,由于提取液中成分复杂
需要将目的蛋白从复杂的大分子混合物中分离纯化,得到高纯度具有生物学活性的目的物。分离纯化技术在生物科学和化学药品分析领域扮演着重要角色。以下是对分离纯化早期技术的详细介绍。
1.设备材料的选择
在分离纯化过程中,设备材料的选择至关重要。材料应选用符合“易于清洁或消***,耐腐蚀,化学变化或药物吸附”原理的材料。例如,动物细胞培养生物反应器罐体材料,接触料液部分由SUS316L不锈钢制成,非接触料液部分由SUS304不锈钢制成。
2.亲和层析技术
亲和层析是利用生物分子之间所具有的专一而又可逆的亲和力使生物分子分离纯化的技术。这种技术适用于分离具有特定亲和力的生物分子。例如,可以利用亲和层析技术分离蛋白质。
3.T过滤技术
T过滤是一种利用过滤介质实现固液分离的单元操作。在外力作用下,利用薄片形多孔性介质(如滤布)截留固液悬浮液。这种技术适用于可离子化的物质的分离,如氨基酸、生物碱、有机酸和酚类。
4.阳离子交换树脂和阴离子交换树脂
阳离子交换树脂和阴离子交换树脂是用于分离不同电荷离子的材料。例如,强酸性阳离子交换树脂(-SO3-H+)适用于分离生物碱,弱酸性阳离子交换树脂(-COO-H+)适用于分离有机酸。而强碱性阴离子交换树脂(-N+(C)3CL-)适用于分离有机酸。
5.质谱联用系统
质谱联用系统具有很好的灵敏度和高选择性。最初,专家学者尝试将未经前处理的生物样本直接进入系统检测,但经过大量实践发现,除了极少数情况下只需将样品进行简单处理就可以检测,大多数情况下需要将样品进行预处理。
6.化学药品分析方法
化学药品分析方法采用分析仪器或装置对化学药品中的成分进行定性或定量检测分析。由于化学药品成分相对单一和结构相对简单,相对应供试品溶液的制备方法和检验检测也比较简单,易于操作。
7.动态液滴微萃取技术
动态液滴微萃取是一种微量样品富集和进样的技术,样品富集机理为液液萃取。例如,水样中的十二烷基硫酸钠,与亚甲基兰形成离子对,用氯仿液滴(约1.3μl)收集,用光学检测法检测。
8.针式过滤器过滤
将2mL样品经孔径为0.22μm、直径为13mm的针式过滤器过滤,弃去前0.5mL过滤液,收集续滤液至棕色玻璃进样小瓶中,待分析。
9.蛋白质分离纯化技术应用
蛋白质分离纯化技术在生物科学和化学药品分析领域应用广泛。欧美企业在该领域处于垄断地位。细胞中蛋白质种类多样,蛋白质分离纯化是将某种蛋白质从细胞中提取出来,通常提取得到的蛋白质含有杂质。
通过以上技术,可以有效地从复杂的大分子混合物中分离纯化出目的蛋白,为生物科学和化学药品分析领域的研究提供有力支持。
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